Пять сил:
● Прибор настроен на этап экстракции и очистки нуклеиновой кислоты.
● Прибор оснащен модулем ультразвуковой экстракции.
● Прибор настроен на полностью автоматическую
● Прибор сконфигурирован с усилением переменной температуры.
● Прибор оснащен полностью закрытым набором реагентов.
1. Необходимо ли экстрагировать и очищать реагенты для обнаружения нуклеиновых кислот?
Принцип обнаружения нуклеиновых кислот заключается в следующем: под действием праймера ДНК-полимераза осуществляет цепную реакцию амплификации матричной ДНК/РНК (требующей обратной транскрипции NA), а затем детектируют количество выделившегося флуоресцентного сигнала для определения содержит ли образец нуклеиновую кислоту (ДНК/РНК) выявляемого патогена.
1)Образцы, которые не были экстрагированы или очищены, могут содержать множество компонентов, влияющих на конечный результат: нуклеазу (которая может растворять целевую нуклеиновую кислоту и вызывать ложноотрицательный результат), протеазу (которая может снижать ДНК-полимеразу и вызывать ложноотрицательный результат), тяжелые металлы соль (которая приводит к инактивации синтазы и вызывает ложноположительный результат), слишком кислый или слишком щелочной уровень pH (что может привести к сбою реакции), неполная РНК (приводящая к ложноотрицательному сбою обратной транскрипции).
2) Некоторые образцы трудно амплифицировать напрямую: грамположительные образцы и некоторые паразиты из-за их толстых клеточных стенок и других структур, если они не проходят процесс экстракции и очистки нуклеиновой кислоты, набор без экстракции может оказаться неэффективным для таких образцов. образцы.
Поэтому рекомендуется выбирать тестовый набор или инструмент, предназначенный для этапа экстракции нуклеиновой кислоты.
2. Химическая экстракция или физическая ультразвуковая фрагментация?
Вообще говоря, химическая экстракция может применяться для большей части процессов предварительной обработки и очистки.Однако у толстостенных грамположительных бактерий и некоторых паразитов химическая экстракция не позволяет получить эффективные матрицы нуклеиновых кислот, что приводит к ложноотрицательному обнаружению.Кроме того, при химической экстракции часто используются сильные агенты: если элюирование не является тщательным, в реакционную систему легко ввести сильную щелочь, что приведет к неточным результатам.
Ультразвуковая фрагментация использует физическое дробление, которое успешно применяется GeneXpert, ведущим предприятием в области ПОКТ для использования человеком, и имеет абсолютное преимущество при экстракции нуклеиновых кислот из некоторых сложных образцов (таких как Mycobacterium Tuberculosis).
Поэтому рекомендуется выбирать тестовый набор или инструмент, оснащенный этапом экстракции нуклеиновой кислоты.и оптимально, если есть модуль ультразвуковой экстракции.
3. Ручной, полуавтоматический и полностью автоматический?
Это проблема стоимости рабочей силы и эффективности работы.В настоящее время в больницах для домашних животных не хватает персонала, а извлечение и обнаружение нуклеиновых кислот — это работа, требующая определенных навыков и опыта.Нет сомнений в том, что полностью автоматическая машина для выделения и обнаружения нуклеиновых кислот является идеальным выбором.
4. Усиление при постоянной температуре или усиление при переменной температуре?
Реакция амплификации представляет собой звено обнаружения нуклеиновых кислот, и профессиональная технология, используемая в этом звене, сложна.Грубо говоря, ферменты используются для амплификации нуклеиновой кислоты.В процессе амплификации детектируют усиленный сигнал флуоресценции или встроенный сигнал флуоресценции.Вообще говоря, чем раньше появляется сигнал флуоресценции, тем больше содержание целевого гена в образце.
Амплификация при постоянной температуре представляет собой амплификацию нуклеиновой кислоты при фиксированной температуре, тогда как амплификация при переменной температуре представляет собой циклическую амплификацию, строго соответствующую денатурации-отжигу-удлинению.Было проведено постоянное время усиления температуры, в то время как время усиления переменной температуры сильно зависит от скорости повышения и падения температуры прибора (в настоящее время многие производители могут выполнять 40 циклов усиления примерно за 30 минут).
Если лабораторные условия хорошие и зонирование строгое, разумно сказать, что разница в точности между ними не будет большой.Однако амплификация с переменной температурой позволит синтезировать больше продуктов нуклеиновых кислот за относительно более короткое время.Для лабораторий без строгого зонирования и профессиональной подготовки персонала риск утечки аэрозоля нуклеиновых кислот будет выше, ложноположительный результат возникает сразу же после утечки, и устранить его крайне сложно.
Кроме того, амплификация при постоянной температуре также более склонна к неспецифической амплификации, когда образец сложный (относительная температура реакции ниже, и чем выше температура удлинения, тем лучше специфичность связывания праймера).
Что касается современной технологии, усиление с переменной температурой является более надежным.
5. Как избежать риска утечки продуктов амплификации нуклеиновых кислот?
В настоящее время многие производители выбирают пробирку для ПЦР с железистым типом в качестве пробирки для реакции нуклеиновой кислоты, которая герметизирована трением, а температурная денатурация при переменной температуре, денатурация при переменной температуре ПЦР-амплификации достигает 90 градусов.
Цельсия.Повторяющийся процесс расширения при нагревании и сжатия при охлаждении представляет собой серьезную проблему для герметизации пробирки для ПЦР, а пробирка для ПЦР с сальником относительно легко может вызвать утечку.
Предпочтительно проводить реакцию с полностью герметичным набором/пробиркой, чтобы избежать утечки продукта реакции.Было бы идеально, если бы можно было разработать полностью герметичный набор для выделения и обнаружения нуклеиновых кислот.
Таким образом, новая полностью автоматическая машина для выделения и обнаружения нуклеиновых кислот компании New Tech предлагает пять вышеуказанных оптимальных вариантов.
Время публикации: 09 августа 2023 г.
